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0501 纸色谱法

来源:三部   分类:三部通则      页码:418  
0501 纸色谱法
纸色谱法系以纸为载体,以纸上所含水分或其他物质为固定相,用展开剂进行展开的分配色谱法。供试品经展开后,可用比移值(Rf)表示其各组成成分的位置(比移值=原点中心至斑点中心的距离/原点中心至展开剂前沿的距离)。由于影响比移值的因素较多,因而一般釆用在相同实验条件下与对照标准物质对比以确定其异同。用作药品鉴别时,供试品在色谱图中所显主斑点的位置与颜色(或荧光),应与对照标准物质在色谱图中所显主斑点相同;用作药品纯度检查时,取一定量的供试品,经展开后,按各品种项下的规定,检视其所显杂质斑点的个数和呈色深度(或荧光强度);进行药品含量测定时,将待测色谱斑点剪下经洗脱后,再用适宜的方法测定。 1.仪器与材料 (1)展开容器 通常为圆形或长方形玻璃缸,缸上具有磨口玻璃盖,应能密闭。用于下行法时,盖上有孔,可插入分液漏斗,用以加入展开剂。在近顶端有一用支架架起的玻璃槽作为展开剂的容器,槽内有一玻棒,用以压住色谱滤纸。槽的两侧各支一玻棒,用以支持色谱滤纸使其自然下垂;用于上行法时,在盖上的孔中加塞,塞中插入玻璃悬钩,以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上,并除去溶剂槽和支架。 (2)点样器常用具支架的微量注射器(平口)或定量毛细管(无毛刺),应能使点样位置正确、集中。 (3)色谱滤纸 应质地均匀平整,具有一定机械强度,不含影响展开效果的杂质;也不应与所用显色剂起作用,以免影响分离和鉴别效果,必要时可进行处理后再用。用于下行法时,取色谱滤纸按纤维长丝方向切成适当大小的纸条,离纸条上端适当的距离(使色谱滤纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂中,并使点样基线能在溶剂槽侧的玻璃支持棒下数厘米处)用铅笔划一点样基线,必要时,可在色谱滤纸下端切成锯齿形便于展开剂向下移动;用于上行法时,色谱滤纸长约25cm,宽度则按需要而定,必要时可将色谱滤纸卷成筒形。点样基线距底边约2.5cm。 2.操作方法 (1)下行法 将供试品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用微量注射器或定量毛细管吸取溶液,点于点样基线上,一次点样量不超过10μl。点样量过大时,溶液宜分次点加,每次点加后,待其自然干燥、低温烘干或经温热气流吹干,样点直径为2~4mm,点间距离为1.5~2.0cm,样点通常应为圆形。 将点样后的色谱滤纸的点样端放在溶剂槽内并用玻棒压住,使色谱滤纸通过槽侧玻璃支持棒自然下垂,点样基线在压纸棒下数厘米处。展开前,展开缸内用各品种项下规定的溶剂的蒸气使之饱和,一般可在展开缸底部放一装有规定溶剂的平皿,或将被规定溶剂润湿的滤纸条附着在展开缸内壁上,放置一定时间,待溶剂挥发使缸内充满饱和蒸气。然后小心添加展开剂至溶剂槽内,使色谱滤纸的上端浸没在槽内的展开剂中。展开剂即经毛细作用沿色谱滤纸移动进行展开,展开过程中避免色谱滤纸受强光照射,展开至规定的距离后,取出色谱滤纸,标明展开剂前沿位置,待展开剂挥散后,按规定方法检测色谱斑点。 (2)上行法 点样方法同下行法。展开缸内加入展开剂适量,放置待展开剂蒸气饱和后,再下降悬钩,使色谱滤纸浸入展开剂约1cm,展开剂即经毛细作用沿色谱滤纸上升,除另有规定外,一般展开至约15cm后,取出晾干,按规定方法检视。 展开可以单向展开,即向一个方向进行;也可进行双向展开,即先向一个方向展开,取出,待展开剂完全挥发后,将滤纸转动90°,再用原展开剂或另一种展开剂进行展开;亦可多次展开和连续展开等。
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